本
文
摘
要
常规来讲，体育赛事中 *** 的检测大多是先将运动员生物样本中的各种分子萃取、分离，然后再依次确定这些分子“身份”。 虽然从运动员身上取来的样品一般都是液体样品，如血液，尿液，汗液等，但在检测的过程中，实际上是分了气体、液体两条赛道的。 尿液是最常用到的检测标本，而血液样品主要用于检测那些一般不容易进入尿液里的分子，如生长激素、红细胞生成素等蛋白/糖蛋白类激素，以及外源性红细胞等可以提高在赛事中表现力的活性生物制品。 尿液中一部分较容易挥发的分子（如一部分小分子类固醇类 *** ）会参加气体赛道的检测，而血液以及尿液中剩下的那些分子量比较大且表现较为“老实”的分子则会出现在液体检测的赛道中。 检测step 1——色谱分离不同分子 虽然赛道不尽相同，但在气体与液体赛道中不同分子的检测过程却殊途同归。这两种检测方式的第一步都是先将复杂样品中所含有的各种分子分隔开，让它们乖乖排队站好。 通过样品中不同分子的分子质量、所带电荷、亲疏水性等物理特征的区别，可以将不同的分子以一定的规律分开，这就好比让这些分子跑一个漫长的马拉松，然后通过漫长的路程区分出它们“耐力”的区别。 质谱仪可以将色谱分离纯化后的分子进行电离，然后分析它们的“特征指纹”——质谱，从而确定这个分子的真实身份。 值得注意的是，目前在 *** 检测领域里有多种不同且常见的质谱技术，它们都有自己的独门绝技。例如主要用于检测痕量 *** 的DFS 高分辨双聚焦磁质谱和主要用于区分内源性和外源性睾丸酮的DELTA V 同位素质谱等（人工合成的睾丸酮往往具有更高的碳同位素一致性，而人体自己产生的睾丸酮分子内的碳原子会含有一部分C13或C14）。 说到睾丸酮，其实还有一段很惊险的旧事，就发生在我们非常熟悉的“不懂球的胖子”——刘国梁身上。1999年世乒赛上，刘国梁被查出血清表睾酮（一种睾丸酮变体）偏高，被怀疑是服用了外源性的 *** ，险些被禁赛。但实际上，他的血清睾丸酮水平异常是他自己的生理情况导致的（也许天生骨骼清奇？），并非服用 *** 。当时正是靠同位素质谱这一新技术以及国际乒联的多次飞行抽检，才让刘国梁洗清了冤屈。 虽然目前色谱+质谱(LC-MS/GC-MS)联用法仍然是 *** 检测的黄金标准，但其它一些技术也在这些年逐渐崭露头角。如基于微流控免疫分析的汗液中特殊分子（ *** 、 *** 等）快检技术（可在20-30分子内完成测试），针对一些常见 *** （如麻黄碱类）的ELISA免疫分析试剂盒，走电化学、毛细管电泳等技术路线的 *** 检测技术等等。 不光是检测技术，运动员样品的运输保存技术、样品提取技术对非法 *** 的有效检出也有很大的影响。 为了防止尿样/血样中的 *** 分子被水解或在酶的影响下失活，样本的储存运输条件相当苛刻，比如，样本需要在冷藏（4︒C）的环境下尽快送检，而需要长期储存的样品则必须被维持在-20︒C之下。 2020年，国际 *** 检测机ITA还专门设立了一个用以长期储存样品的保存设施，可将运动员身上采集的各类标本保存十年以上。此外，样品运输到实验室之后，还需要经过比较复杂的萃取流程，在排除掉细胞与蛋白的干扰后，才能进入色谱/质谱检测的流程。 在三种不同滤纸上的干血点。血液滴在试纸上后会在30分钟左右的时间内逐渐干燥。但一般为保险起见，风干时间至少为2小时 在经过东京奥运会的试验之后，北京冬奥会的 *** 检测流程中正式纳入了一种新的样本采集/运输技术——干血点（Dry Blood Spot, DBS）技术。其实这个技术说起来非常容易理解。就是将运动员的一滴血液（可为静脉血/指尖血）滴在滤纸（或硝酸纤维素膜）上，待其自然风干两三个小时即可制成。干血点技术并不是什么新技术，它曾在人类与艾滋病、乙型/丙型肝炎、疟疾等传染病的斗争中起到了很大的作用，尤其是在欠发达地区病人的样本采集活动中被广泛应用。 参考文献： [1] Zhu, Hongbo. Development of Micro Gas Chromatographs and Micro Photoionization Detectors. Diss. 2019. [2] Denniff, Philip, and Neil Spooner. "Effect of storage conditions on the weight and appearance of dried blood spot samples on various cellulose-based substrates." Bio *** ysis 2.11 (2010): 1817-1822. [3] http://www.xinhuanet.com/politics/2016-02/27/c_128756864.htm [4] http://www.thermo.com.cn/Resources/200901/21111518394.pdf [4] http://www.thermo.com.cn/e-newsletter/13/pdf/2-1.pdf 
目前 *** 分析的大致流程
液相色谱/气相色谱技术（A）典型的液相色谱结构示意图，其中横向柱状者为LC分离柱。（B）气相色谱结构简图，其中状如线圈者为GC分离柱。（C）一种以芯片式集成于硅片表面的微型GC分离柱。（图片来源： *** （A）,参考文献1（B+C））检测step 2——质谱仪验明正身
北京冬奥会：干血点技术首次正式使用
